Comment redémarrer une colonne C18

Étape 1

Déconnectez la colonne C18 du flux et replacez la colonne dans le sens inverse. Faire revenir le solvant dans la colonne dans le sens opposé atténuera l'effet de compactage qui se produit avec le temps. Il faut veiller à ne pas perdre une grande quantité de matériau d’emballage à la fin de la colonne. Certains fabricants utilisent un maillage plus grand à l'extrémité amont de la colonne, de sorte que lorsque le sens de l'écoulement est inversé, le maillage le plus large se trouve en position aval. Cette méthode de régénération est appelée lavage à contre-courant. Pour éviter que des matériaux d'emballage ne pénètrent dans le détecteur du système et éventuellement provoquent un bouchon, cela permet au système de fonctionner sans que le détecteur soit connecté et dirige le flux de sortie de la colonne vers les déchets.

Étape 2

Placer le tube d'admission de solvant dans une série de solvants pour éluer les composés retenus avec la colonne en sens inverse. Les séries de solvants utilisés varient dans leurs caractéristiques hydrophiles. En faisant varier les solvants, vous éluez des composés de nature hydrophile également variée. Utilisez successivement 50 ml de chacun des solvants suivants: eau (si vous utilisez un tampon dans votre solvant), méthanol, isopropanol, dichlorométhane, hexane, dichlorométhane et isopropanol.

Étape 3

Reconnectez la colonne dans le bon sens et faites circuler le solvant dans le système. Utilisez au moins 75 ml de solvant pour laver la colonne avant de continuer. Exécutez un test d'injection d'un standard que vous avez exécuté lorsque la colonne était nouvelle et vérifiez les résultats. Portez une attention particulière aux heures de rétention maximale, aux files d’attente maximales et au temps total d’analyse. La mesure dans laquelle ces attributs coïncident avec l'exécution initiale de la colonne lorsqu'elle était nouvelle indiquera le degré de régénération de la colonne. Si les résultats ne sont pas satisfaisants, remplacez la colonne par une nouvelle et jetez l'ancienne dans la corbeille.